www香蕉视频-少妇2做爰hd韩国电影-日韩一二三区-激情国产精品-国产精品天天干-日日操综合-午夜性爽视频-久久久国产精华特点-啪啪一级视频-欧美精品三级在线-久久亚洲激情-日本wwwwww-久草免费在线观看视频-钻石午夜影院-成人女同av免费观看-日韩在线欧美-精品亚洲国产成人a片app

 用于快速缺失內(nèi)源性人蛋白的可選擇的一步PCR介導的降解因子整合方法

科羅拉多大學醫(yī)學院科學家Ryan M. Sheridan和David L. Bentley開發(fā)了一種選擇性的基因盒，它采用CRISPR/Cas9基因編輯器使內(nèi)源性的人蛋白的C端標記大腸桿菌二氫葉酸還原酶（eDHFR）降解因子。這個基因盒可以利用框內(nèi)自我剪切2A多肽和嘌呤霉素抗性基因方法進行率正確整合。PCR擴增供體的eDHFR基因盒片段，每個片段末端帶有100bp同源片段，它們通過以向?qū)?/span>RNA為目標的可以切割3’端開放性閱讀框的雙鏈DNA同源定向修復的方法被整合。據(jù)此原理，Ryan M. Sheridan和David L. Bentley生成了含有eDHFR降解因子標簽的三個內(nèi)源性蛋白的細胞。當從培養(yǎng)基中去除抗生素甲氧芐氨嘧啶時，在2-4小時就缺失了90%以上每個帶有eDHFR標簽的內(nèi)源性蛋白，這種缺失可以通過再次加入甲氧芐氨嘧啶得到恢復。嘌呤霉素的選擇性可以利用100bp同源性片段率回收框內(nèi)降解因子融合體。該方法可以適用于生成全基因組范圍的突變細胞庫。

原文：

Ryan M. Sheridan and David L. Bentley, Selectable one-step PCR-mediated integration of a degron for rapid depletion of endogenous human protein, BioTechniques 60:69-74 (February 2016)